动物细胞扩大培养

关于动物细胞扩大培养的科研文献分析  液氮罐

1.该实验研究的目的或意义

利用动物细胞培养可以生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分，利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占生物高技术产品*的50%，为了培养规模的进一步扩大、优化细胞培养环境、提高产品的产出率与保证其质量，动物细胞大规模培养技术已成为各生产企业发展至关重要的环节。

2.为达到该目的采用的什么方法

根据动物细胞的类型和培养特性，大规模培养可采用贴壁培养、悬浮培养和固定化培养等三种培养方法进行培养。

3.陈述该研究的结果

①贴壁培养：优点：(1) 细胞紧密黏附于固相表面，可直接倾去旧培养液，清洗后直接加入新培养液，容易更换培养液;

(2) 因细胞固定载体表面，不需过滤系统，容易采用灌注方式培养，从而达到提高细胞密度的目的;

(3) 当细胞贴壁于生长基质时，细胞将更有效的表达一种产品;

(4) 同一设备可培养多种细胞，并根据需要采用不同的培养液和细胞的比例。

缺点：(1) 细胞繁殖贴壁后不易消化下来，培养的扩大比较困难;

(2) 培养设施占地面积大，设备投资大;液氮罐

(3) 采用细胞反应器培养，细胞无法进行显微镜观察，不能有效监测细胞的生长状态;

(4) 在测定和控制细胞所处环境的*均匀化方面比较困难。

②悬浮培养：优点：(1) 操作简单、培养条件均一、便于进行定量研究;

(2) 传质和传氧比较好，有利于细胞与培基中的营养物质和气体充分接触，而且易于控制培养条件(温度、pH、氧分压和CO2等);

(3) 它们在离体培养时不需要附着物，只需悬浮于培养液中就可以良好生长;

(4) 悬浮培养法细胞增殖快，产量高，设备结构简单;

(5) 细胞传代时不需要再分散，只需按比例稀释即可继续培养。可借鉴细菌发酵的经验，容易扩大培养规模，可连续扩大生产量;

(6) 易于在连续密闭的系统中进行，减少了操作步骤和污染的机会。

③固定化培养：吸附法、包埋法、共价贴附法、微囊法、离子/共价交联法

4.该实验的创新点及不足

该实验的方法创新点在于方法较为全面，优缺点分明，不足之处在于方法比较通用，没有什么特别亮点的培养方法。

5.你在改实验基础上继续研究的设计思路

既然大规模培养了细胞，如何能保存细胞也是一个问题，所以我想从保存细胞方面继续设计研究。大概的试验方法如下：

①.挑选细胞：选择生长旺盛期, 细胞界限清楚, 立体感强, 形态良好的细胞。

②.消化细胞： 按细胞的常规消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.营养液(不含

血清), 以1000r/min,离心20分钟，弃上清。

③.冻存悬液的制备： 将离心后沉淀的细胞收集起来, 加入适量冻存液, 轻轻吹打数次, 制成细胞悬液。

④.分装封口： 将上述悬液分装于安瓶内, 每支安靓装1 毫升, 火焰封口, 贴好标记, 装入纱布袋中。

⑤.梯度降温： 将严密封口加注标记的细胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小时, 然后放入气态冷冻30分钟，使其降至-70℃以下，再直接浸入液氮中冻存。

⑥.复苏培养：复苏细胞时, 从液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并适当摇匀, 使其在1分钟内融化*。在无菌条件下打开安瓶,将细胞悬液移入培养瓶中,1ml细胞悬液加20ml培养液, 然后放入37℃ 培养箱中培养, 次日更培养1次。

⑦.观察结果：观察复苏培养的细胞的生民贴壁状态、细胞生长繁殖速度和细胞传代能力。如果细胞贴壁良好, 仍能继续传代下去, 其生长速度与冻前比较无明显差异, 则可认为冻存结果比较满意。液氮罐